Методы анализа гормонов

Методы гормональных исследований

Методы анализа гормонов

Тесты функциональной диагностики Используются для определения деятельности яичников и характеризируют эстрогенную насыщенность организма:

I. Исследование шеечной слизи – метод основан на том, что в течение нормального менструального цикла физико-химические свойства слизи подвержены изменениям: к моменту овуляции увеличивается ее количество и уменьшается вязкость под действием некоторых ферментов слизи, активность которых повышается к этому периоду.

1. Симптом “зрачка” — расширение наружного зева слизью цервикального канала. Симптом связан с изменением количества слизи в зависимости от гормональной насыщенности организма. Симптом становится положительным с 5-7 дня цикла.

Оценивается по трехбальной системе: 1 балл (+): наличие небольшой темной точки (ранняя фолликулиновая фаза); 2 балла (++): 0,2-0,25 см (средняя фолликулиновая фаза); 3 балла (+++): 0,3-0,35 см (овуляция).

После овуляции симптом “зрачка” постепенно ослабевает и исчезает к 20-23 дню менструального цикла.

2. Симптом “папоротника” — кристаллизация шеечной слизи под влиянием эстрогенов.

Оценивается по трехбалльной системе: 1 балл (+) — появление мелких кристаллов (ранняя фолликулиновая фаза, с незначительной секрецией эстрогенов); 2 балла (++) — четкий рисунок кристаллов (средняя фолликулиновая фаза с умеренной секрецией эстрогенов); 3 балла (+++) — сильно выражена кристаллизация в виде листа (максимальная продукция эстрогенов при овуляции). Симптом отрицательный в лютеиновую фазу цикла.

3. Симптом натяжения “шеечной слизи” — растяжение слизи более 6 см корнцангом, введенным в канал шейки матки. Слизь растягивают в нить, длину которой измеряют в сантиметрах.

Тест оценивают по трехбальной системе: 1 балл (+) — длина нити до 6 см (невысокая эстрогенная стимуляция); 2 балла (++) – 8-10 см (умеренная эстрогенная стимуляция); 3 балла (+++) – 15-20см (максимальная продукция эстрогенов).

В лютеиновую фазу цикла натяжение слизи уменьшается

II. Кольпоцитологическое исследование клеточного состава влагалищных мазков – основано на циклических изменениях эпителия влагалища.

1. Реакция влагалищного мазка:

А – в мазке определяются базальные, парабазальные клетки, лейкоциты — резкая эстрогенная недостаточность;

Б – в мазке парабазальные клетки и единичные промежуточные — выраженная гипофункция яичников;

В – в мазке промежуточные клетки и единичные поверхностные — умеренная гипофункция яичников (присутствуют в нормальном менструальном цикле в фолликулиновой и лютеиновой фазах, за исключением периовуляторного периода);

Г – в мазке поверхностные клетки, единичные промежуточные, среди поверхностных — клетки со сморщенными ядрами — хорошая эстрогенная насыщенность, определяется в периовуляторный период.

2. Индекс созревания — процентное соотношение поверхностных, промежуточных и парабазальных клеток. Записывается в виде трех чисел, из которых первое — процент парабазальных — второе — промежуточных и третье — поверхностных клеток. 0/20/80 — периовуляторный период, максимальный уровень эстрогенов и поверхностных клеток; 0/70/30 — ранняя фолликулиновая фаза.

3. Кариопикнотический индекс (КПИ) — процентное отношение поверхностных клеток с пикнотическими ядрами к клеткам, имеющим везикулярные (непикнотические) ядра. КПИ в начале фолликулиновой фазы 25-30% к моменту овуляции — 60-70%, в лютеиновой фазе снижается до 25%.

III. Измерение базальной температуры — тест основан на гипертермическом эффекте прогестерона. Последний оказывает непосредственное воздействие на центр терморегуляции, расположенный в гипотамаламусе. Поэтому при повышении секреции прогестерона во вторую половину нормального менструального цикла отмечается повышение базальной температуры на 0,4-0,80С.

В фолликулиновую фазу базальная температура ниже 370С, период овуляций падает до 36,20 — 36,30С, после овуляции повышается до 37,10 — 37,30С, редко до 37,60С и держится на субфебрильных цифрах в лютеиновой фазе (не менее 10-12 дней), непосредственно перед менструацией падает до исходных цифр.

По базальной температуре можно судить о продолжительности фаз цикла, их полноценности, наличии или отсутствии овуляции.

IV. Гистологическое исследование соскоба эндометрия. Метод основан на появлении характерных изменений эндометрия под воздействием стероидных гормонов яичника. Эстрогены вызывают пролиферацию, а прогестерон — секреторные преобразования.

В норме в фазу секреции железы расширены, имеют полиповидную форму, видны компактный и губчатый слой. Цитоплазма в клетках железистого эпителия светлая, ядро бледное. В просвете желез виден секрет. При гипофункции желтого тела железы слабо извитые, с узкими просветами.

При ановуляторном менструальном цикле железы эндометрия узкие или несколько расширенные, прямые или извитые. Железистый эпителий цилиндрический, высокий, ядра крупные, расположены базально или находятся на различных уровнях.

Атрофический эндометрий характеризуется преобладанием стромы, иногда видны единичные железы. Соскоб чрезвычайно скудный

V. Исследование крови. Основано на том, что состав форменных элементов изменяется в соответствии с фазами менструального цикла. В позднюю фолликулиновую фазу увеличивается количество лейкоцитов, тромбоцитов и эритроцитов. К началу менструации количество указанных элементов минимальное. Метод менее достоверный из-за больших индивидуальных колебаний.

VI. Кожно-аллергический тест. Основан на появлении аллергической реакции в ответ на введение гормональных препаратов (эстрогенов, прогестерона). На месте введения гормональных препаратов образуется папула, размеры которой увеличиваются при нарастании уровня эстрогенов или прогестерона.

При этом одновременно с увеличением размеров папулы возникает местная аллергическая реакция: покраснение папулы, зуд. Если цикл ановуляторный, изменение папулы на введение эстрогенов отсутствуют.

Изменение папулы при введении прогестерона в период предполагаемой максимальной функции желтого тела (поздняя лютеиновая фаза) свидетельствует о происшедшей овуляции и удовлетворительной функции желтого тела. Тест проводят в течение нескольких менструальных циклов.

Ранее для Исследования в сыворотке крови и моче содержания половых стероидных гормонов в клинической практике было возможно

Использование биохимического метода по цветной реакции Кобера. В настоящее время используются радиоиммунологический (РИА) и иммуноферментный (ИФА) методы, которые являются более более простыми, точными и специфическими методами анализа.

РИА основан на обнаружении меченых радионуклидами гормонов in vitro. Определяемый гормон конкурирует за место связывания АТ до химического равновесия со своим меченным аналогом (АГ).

Сравнивая степень уменьшения связывания меченого гормона с аналогичным действием известного количества гормона, взятого в качестве стандарта, определяется концентрация гормона в плазме крови или другой жидкости.

С помощью РИА в крови определяют гормоны гипоталамуса (люлиберин, фолиберин и др.), гипофиза (ФСГ, ЛГ, пролактин, АКТГ, ТТГ и др.

), яичников (эстрогенные соединения – Э1, Э2, Э3, прогестерон, андрогены), надпочечников (кортизол, тестостерон, альдостерон), щитовидной железы (Т3, Т4) и др. желез.

В суточной моче определяют 17-кетостероиды – метаболиты андрогенов, которые образуются в организме женщины в яичниках, надпочечниках и внегонадно.

Гормонально-функциональные пробы применяются для топической и дифференциальной диагностике эндокринных заболеваний как по горизонтали (яичники-надпочечники-щитовидная железа), так и по вертикали (матка – яичники – гипофиз – гипотоламус – нейротрансмитерные механизмы).

А) проба с прогестероном – применяется при аменорее любой этиологии для исключения маточной формы; считается положительной, если через 2-4 дня после 6-8 дневного внутримышечного введения прогестерона или через 8-10 дней после однократного введения оксипрогестерона капроната у больной появляется менструальноподобная реакция. Положительная проба исключает маточную форму аменореи и свидетельствует о дефиците прогестерона. Отрицательная проба может быть при маточной аменорее или при эстрогенной недостаточности.

Б) проба с эстрогенами и прогестероном – проводится для исключения (подтверждения) маточной или яичниковой формы аменореи.

Больной в течение 10-14 дней вводят один из эстрогенных препаратов в/м (эстрадиола бензоат, фолликулин) или внутрь (этинил эстрадиол), затем прогестерон как и в пробе с прогестероном.

Наступление менструальноподобной реакции свидетельствует о выраженном дефиците эндогенных эстрогенов, отрицательный результат указывает на маточную форму аменореи.

В) проба с дексаметазоном – применяется для определения характера гиперандрогении у женщин с признаками вирилизации, основана на угнетении секреции АКТГ.

До и после проведения пробы определяют содержание 17-КС.

Снижение уровня 17-КС после проведения пробы на 50-75% указывает на надпочечниковый источник андрогенов (проба положительная), на 25-30% – на яичниковое происхождение андрогенов (проба отрицательная).

Г) проба с кломифеном – показана при заболевании, сопровождающимся ановуляцией, чаще на фоне олиго – или аменореи. Пробу проводят после месячных или менструальноподобной реакции.

Назначается кломифена цитрат с 5 по 9 день от начала менструальноподобной реакции, действие его ощущается через гипоталамус.

Отрицательная проба с кломифеном (отсутствие увеличения концентрации эстрадиола, гонадотропинов в плазме крови, монофазная базальная температура, отсутствие менструальноподобной реакции) указывает на гипоталамо-гипофизарное нарушение.

Д) проба с люлиберином – проводится при отрицательной пробе с кломифеном. Внутривенно вводят 100 мг синтетического аналога люлиберина.

До начала введения препарата и через 15, 30, 60 и 120 мин после введения через постоянный катетер из локтевой вены берут кровь для определения содержания ЛГ.

При положительной пробе к 60-й мин содержание ЛГ нарастает до цифр, соответствующих овуляции, что указывает на сохраненную функцию передней доли гипофиза и нарушение функции гипоталамических структур.

26. Биопсия шейки матки: прицельная, конусовидная. Показания, техника.

Источник: https://uchenie.net/metody-gormonalnyx-issledovanij/

Методы определения гормонов

Методы анализа гормонов

Выделение и качественный анализ гормонов производят многими методами.

Их подразделяют на четыре основные группы: биологические, химические, иммунологические и методы сатур анионного анализа. Классификация методов определения гормонов в значительной мере условна, так как многие из них являются комбинированными.

Биологические методы определения гормонов базируются на учете специфичности их влияния при тестировании на лабораторных животных или in vitro. Эффект действия гормонов оценивается по изменению массы органов, их гистологического строения, физиологических, биохимических и других показателей.

Например, активность андрогенов определяют по изменениям массы гребня у кастрированных петухов, эстрогенов — по изменениям вагинального эпителия у овариоэктомированных мышей, прогестерона — по сохранению беременности у крольчих и т. п.

Распространенным является метод суммарного определения действия гонадотропинов (ФСГ и ЛГ) по увеличению массы матки у неполовозрелых мышей. Применяют и другие методы, в которых учитывается увеличение массы яичников у неполовозрелых крыс, овуляция у крольчих и т. д.

Определение гонадотропного гормона в СЖК осуществляют на самцах лягушек. Общую активность гонадотропина выражают в мышиных или крысиных единицах по минимальной дозе, которая вызывает на 50% увеличение матки инфантильных мышей или крыс, и сравнивают с международным стандартом.

Согласно международному стандарту фоллитропную активность СЖК определяют по увеличению массы яичников у инфантильных крыс, а лютропную — по уменьшению количества аскорбиновой кислоты в яичниках.

Для учета эффекта действия тиротропина (ТТГ) применяют гравиметрический метод, основанный на определении изменения массы щитовидной железы. Более чувствительным является гистологический метод оценки по изменениям высоты клеток тиреоидного эпителия, размеров фолликулов и состояния коллоида. Биологическую активность пролактина определяют по увеличению зобной железы голубя и т. д.

Методы определения гормонов in vitro зачастую более чувствительны и экономичнее других биологических методов.

Поэтому, в последние годы тестирование активности гормонов, особенно гормонов гипофиза и гипоталамуса, производится in vitro в биологических средах (тканях, гомогенатах, клеточных суспензиях), с последующим определением их содержания флюориметрическим или радиоиммунологическим методами.

Химические и физико-химические методы количественного анализа гормонов в биологических жидкостях и тканях получили широкое распространение. Большинство химических методов определения гормонов основано на использовании реакций, с помощью которых выявляют и учитывают особенности их химической структуры.

Очень часто определение содержания гормонов возможно лишь после их предварительного извлечения и очистки, которые достигаются экстракцией, ультрацентрифугированием, хроматографией, осаждением белков и т. д. Для разделения смеси белковых гормонов часто применяют электрофорез в полиакриламидном геле.

Под действием электрического поля заряженные молекулы гормонов перемещаются в геле. При этом поры геля выполняют функцию «молекулярного сита».

Эффективным методом очистки белковых и пептидных гормонов является ионно-обменная хроматография с применением специальных смол и других компонентов. Для разделения катехоламинов и стероидных гормонов применяют адсорбционную (молекулярную) колоночную хроматографию.

Чаще всего в различных методах хроматографии используют растворители с определенной полярностью, которые под действием капиллярных сил обеспечивают перемещение в слое сорбента исследуемых гормонов. В последние годы для количественного анализа стероидных гормонов применяют газожидкостную хроматографию.

Через колонку газового хроматографа, заполненную гранулами адсорбента с растворителем, с помощью газа-носителя (аргон, водород, азот) продувают нагретую в испарительной камере исследуемую смесь. Выход гормонов из колонки в потоке газа регистрируется детектором.

Для газо-жидкостной хроматохрафии требуется предварительная очистка экстрактов стероидов и их разделение с помощью тонкослойной и других видов хроматографии.

Значительная часть химических методов основана на применении колориметрического и флюоресцентного анализов, которые особенно широко используются для определения содержания стероидов. Поглощение света растворами исследуемых гормонов находится в прямой зависимости от их концентрации.

Чувствительность флюориметрических методов определения гормонов в 10—20 раз выше чувствительности спектрофотометрии.

В последние годы химические и биологические методы определения гормонов частично вытесняются радиоиммунологическими методами, которые оказались менее громоздкими, более чувствительными и специфичными.

Иммунологические методы основаны на способности белковых и полипептидных гормонов индуцировать выработку антител при гетероиммунизации.

Для иммунологического тестирования гормонов применяют реакции связывания комплемента, преципитации и торможения пассивной гемагглютинации.

В связи с наличием иммунологической специфичности белковых гормонов иммунологические методы, разработанные для гормонов одного вида животных, как правило, не могут использоваться для определения тех же гормонов у других видов животных.

В основе методов сатурационного или радиолигандного анализа лежит конкурентное взаимодействие молекул гормона и специфических антител или другого связывающего белка.

При введении в систему для тестирования меченого лиганда — гормона, маркированного радиоактивным изотопом или конъюгированного с каким-либо ферментом, происходит насыщение (сатурация) связывающего белка. При последующем добавлении немеченного гормона (антигена) часть молекул лиганда вытесняется из комплекса с белком.

исследуемого гормона методами сатурационного анализа определяют по калибровочной кривой для различных концентраций стандарта. В методах сатурационного анализа используют специфические белки, обладающие высоким сродством к соответствующим гормонам.

С учетом применения специфических белков (антитела, рецепторные белки тканей, транспортные белки плазмы крови) различают следующие методы: радиоиммунологические (ферментноиммунологические), радиолигандно-рецепторные (радиорецепторные) и конкурентного связывания с белками плазмы.

Чувствительность иммунологических методов при применении специфических антител к гормону, меченных радиоактивным изотопом, значительно увеличивается. В связи с этим их выделяют в отдельную группу и называют радиоиммунологическими.

Эти методы основаны на свойствах немеченного антигена вытеснять меченный антиген из соответствующего комплекса антиген — антитело.

В последние годы, в основном в медицине, радиоиммунологические методы широко применяются для определения инсулина, глюкагона, соматотропина, гонадотропинов (ФСГ, ЛГ) и других гормонов.

Для анализа белковых гормонов перспективен ферментноиммунологический метод. В сравнении с радиоиммунологическим он имеет преимущества, так как в данном случае не требуются радиоактивные изотопы, а гормоны, меченные ферментами, имеют более высокую устойчивость при хранении.

Применяемые меченные йодом-125 гормоны можно использовать только в течение 20 дней, с условием их хранения при температуре —20° С, а меченные ферментами гормоны при стерильном приготовлении не теряют активности в течение 6 мес.

Ферментоиммунологический метод в настоящее время успешно применяется для определения гипофизарных гормонов в крови молодняка крупного рогатого скота.

В последние годы получили применение радиорецепторные методы, которые дают возможность определить содержание активной части гормонов, в то время как радиоиммунологическими методами определяют только их общее содержание.

Клеточные рецепторы приготовляют из матки кроликов, крыс или овец — для определения эстрогенов, из молочной железы кроликов — для определения ЛТГ и СТГ и т. д.

Радиорецепторные методы разработаны и используются для определения эстрогенов, АКТГ, пролактина и других гормонов.

Методы конкурентного связывания с белками плазмы базируются на избирательном сродстве их с соответствующими гормонами и широко применяются для определения количества стероидных и тиреоидных гормонов.

В настоящее время разработаны и широко применяются высокоэффективные радиобиологические методы определения ТТГ-активности, основанные на измерении накопления и выделения радиоактивного йода в щитовидной железе после введения ТТГ и измерении радиоактивности крови и ее сыворотки.

Концентрация ТТГ определяется в нанограммах в I мл сыворотки (нг/мл). Для функциональной характеристики щитовидной железы определяется количество свободного тироксина и трийодтиронина в сыворотке крови с помощью радиоиммунологических и других методов.

Однако в связи с их трудоемкостью часто используют метод определения в сыворотке (плазме) связанного с белком йода (СБИ), так как основная часть СБИ сыворотки крови принадлежит тиреоидным гормонам.

Для определения активности щитовидной железы применяют также пробы поглощения индикаторных доз радиоактивного йода.

Важным условием оценки методов определения гормонов является адекватность их показателей с фактическим содержанием гормонов в организме.

Определение содержания белковых, полипептидных гормонов и производных аминокислот в гипофизе, щитовидной и других железах должно осуществляться с учетом концентрации гормонов в инкретирующих органах и в крови, так как синтез, депонирование и инкреция упомянутых гормонов регулируются разными механизмами. Синтезирующиеся в надпочечниках и гонадах стероидные гормоны не депонируются, содержание этих гормонов в железах адекватно отражает их биосинтез и инкрецию. Методы прямого определения гормонообразования в соответствующих органах имеют преимущества, однако для исследований чаще применяют более доступные косвенные методы определения гормонов и их метаболитов в крови и моче.

Для более полной характеристики функциональной деятельности эндокринных желез, некоторые авторы рекомендуют применять комплексную оценку с учетом их функциональной активности, состояния механизмов регуляции и интенсивности инактивации и выделения гормонов из организма.

Гормональный статус у сельскохозяйственных животных необходимо определять с учетом их вида, породы, типов конституции, продуктивности, возраста, пола, условий кормления и содержания.

Это важно для более эффективного применения гормонов и их аналогов в различных областях животноводства и ветеринарии.

, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Источник: https://www.activestudy.info/metody-opredeleniya-gormonov/

Современные методы гормонального анализа

Методы анализа гормонов

Современные методы гормонального анализа

Проф. Н.П. ГОНЧАРОВ

Modern methods of hormonal analysis

N.P. GONCHAROV

ФГУ Эндокринологический научный центр Минздравсоцразвития Российской Федерации, Москва

Представлена характеристика основных методов определения гормонов, включая радиоиммунологические и иммуно-ферментные, а также подробно описаны современные методы иммуноанализа третьего поколения, обладающие высокой чувствительностью, что позволяет определять практически весь основной спектр гормонов и биологически активных соединений. Это открывает новые возможности в диагностике субклинических форм эндокринной патологии.

Ключевые слова: гормоны, методы анализа.

Characteristics of the main methods for hormone detection and measurement including radioimmune and immunoenzyme assays are presented along with the detailed description of up-to-date highly sensitive immunoassays of the third generation.

These methods are described as allowing determination of virtually the entire range of hormones and biologically active compounds. Their application opens up new opportunities for diagnostics of subclinical forms of endocrine pathology.

Key words: hormones, hormonal assays.

Одним из определяющих достижений современной биологии и медицины является создание во второй половине ХХ века методов радиоиммунологического определения гормонов и других биологически активных соединений в различных средах и тканях организма, позволяющих адекватно оценить функциональное состояние эндокринной или любой другой физиологической системы.

Появление радиоиммунологических методов относится к 1960 г., когда две независимые группы исследователей Yalow и S. Вегеоп в США и R.

Ек1п в Великобритании) впервые описали метод определения инсулина и тироксина с помощью са-турационного анализа, основанного на принципе радиоиммуноанализа (РИА).

В первом случае в качестве связывающего компонента были использованы антитела к инсулину, во втором — специфический транспортный белок к тироксину. Работа, посвященная РИА-методу определения инсулина, была удостоена Нобелевской премии.

Впоследствии были созданы и другие методы иммуноанализа. В отличие от ранее использовавшихся биологических и химических методов, иммунологические методы обладают значительными преимуществами.

В настоящее время радиоиммунологические и родственные им неизотопные методы образуют в совокупности единую биотехнологическую систему, позволяющую определять практически неограниченный спектр веществ. Доступность и широкое использование этих методов в виде коммерческих стандартизованных наборов приобретают опреде-

ляющее значение в развитии многих направлений в биологии, медицине и ветеринарии. Различные методы иммуноанализа позволяют определять различные биологически активные вещества с чувствительностью в диапазоне концентраций от 10-6 до 10-12 М и выше.

Общие принципы иммуноанализа

Основополагающим компонентом любого метода иммуноанализа являются антитела — поли-клональные и моноклональные, получаемые in vivo.

Антитела, присутствующие в антисыворотке, обычно имеют молекулярную массу более 150 кД и принадлежат к классу иммуноглобулинов (Ig). Обычно в антисыворотке доминируют IgG, IgA и IgM.

Варианты в структуре аминокислотных остатков Ig определяют различия в местах связывания антигена. Теоретически считается, что таких мест связывания может насчитываться до 1010.

Основной принцип иммуноанализа — это реакция антитела с антигеном. При взаимодействии антитела (АЬ) и антигена (Ag) образуется комплекс (Ab:Ag) по формуле: Ab+AgAb:Ag.

Для методов иммуноанализа биологически активных соединений необходимы следующие составляющие:

—высокоочищенный антиген для иммунизации;

— антисыворотка с высокоспецифичными антителами;

— высокоочищенный меченый антиген с максимально высокой специфической активностью;

© Н.П. Гончаров, 2011 86

e-mail: goncharovN@endocrincentr.ru

— технология разделения свободного антигена от антигена, связанного с антителами.

Краткая характеристика основных компонентов

иммуноанализа

Антитела

Необходимо всегда помнить, что при разработке любых методов иммуноанализа определяющую роль играет оптимальный выбор высокоспецифических антител независимо от системы регистрации сигнала используемого меченого компонента. Нередко в коммерческих наборах выбор антител не оптимален, что может приводить к диагностическим ошибкам.

Поликлональная антисыворотка содержит несколько тысяч различных типов молекул IgG. Принципиальное отличие моноклональных антител — их идентичность. Они предпочтительнее в методе конкурентного иммуноанализа, так как меченый и определяемый антиген (вещество) конкурируют за один и тот же центр связывания.

Знание специфичности их эпитопов имеет существенное преимущество при создании «сандвич»-анализа.

Моноклональные антитела легко получать в больших количествах с помощью гибридомной технологии, что обеспечивает возможность стандартизации метода и тем самым воспроизводимость полученных результатов в течение длительного отрезка времени.

Применение мо-ноклональных антител для иммуноанализа пептидных гормонов требует большой осторожности, так как их высокая специфичность может приводить к связыванию только одной изоформы того или иного гормона. Этот эффект может проявляться также при аффинной очистке пептидов.

Стандарты

Для пептидных и гликопротеиновых гормонов используются международные стандарты ВОЗ. Работу по их созданию и обновлению координирует отдел биологических стандартов Национального института медицинских исследований в Лондоне.

Систематическая информация о стандартах публикуется в докладах ВОЗ.

Высокоочищенные стандарты для низкомолекулярных соединений, например для стероидов, можно приобретать у коммерческих фирм или из международной коллекции стандартов стероидов в Национальном институте здоровья США.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Одной из причин несоответствия между стандартами является природная гетерогенность их молекулярной структуры, которая наблюдается в случае гликопротеиновых гормонов (тиреотроп-ный гормон — ТТГ, лютеинизирующий гормон — ЛГ, фолликулостимулирующий гормон — ФСГ), а также пролактина (Прл) и гормона роста (ГР). изоформ гормонов и их соотношение изменяется в зависимости от источника и технологии

получения гипофизарных гормонов. Другими причинами, влияющими на качество стандартов, могут быть процесс лиофилизации, а также условия и продолжительность их хранения.

Матрикс

Для разбавления стандарта часто используют сыворотки, буферные и белковые растворы. Состав этих растворов или «матриксов» может влиять на реакцию антиген—антитело, в результате чего возникают серьезные систематические ошибки, которые сопровождаются нарушением воспроизводимости результатов анализа.

Это довольно распространенное в иммуноанализе явление обозначают «эффектом матрикса». Принцип сопоставимости анализов заключается в том, чтобы анализируемое вещество в пробе взаимодействовало в тех же условиях, что и в стандартном растворе.

Матриксные эффекты чаще всего влияют на определение ТТГ, общих трийод-тиронина — ТЗ, тироксина — Т4, Прл, ФСГ, ЛГ и стероидов, если они предварительно не выделены из пробы экстракцией.

Для диагностического мониторинга и проведения научных исследований используются следующие основные методы гормонального иммуноана-лиза: метод радиоиммунного анализа, иммунофер-ментный метод (ИФА), сверхчувствительные методы третьего поколения, основанные на измерении усиленного люминесцентного сигнала или регистрации вычлененного во времени флюоресцентного сигнала и электрохимический метод иммуноанализа с использованием высокопроизводительных автоматических анализаторов ряда зарубежных фирм.

Методы радиоиммуноанализа

Неотъемлемым компонентом радиоиммунологического метода является применение радиоактивной метки (трития — 3Н или 1251) с высокой удельной активностью. Регистрация сигнала осуществляется с помощью специальных гамма- (для 1251) или бета-(для 3Н) счетчиков.

Наряду с достоинствами, общими для всех иммунологических методов, РИА-методы имеют и ряд недостатков. К ним в первую очередь относится использование радиоактивного материала (3Н или 1251).

Для персонала лаборатории наличие в наборе радиоактивности не представляет опасности.

Короткий период полураспада 1251 (4—5 нед) также ограничивает время использования РИА-наборов и тем самым снижает их диагностическую эффективность.

Неизотопные методы исследования

Создание 30 лет назад метода включения фермента в антитело или определяемый антиген обеспечило быстрое развитие иммуноферментных методов иммуноанализа. Наиболее широко в качестве

меченого компонента используются пероксидаза хрена и щелочная фосфатаза.

Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). ELISA получил наиболее широкое распространение при определении гормонов в эндокринологии. В качестве твердофазных носителей наиболее широко используются полистироловые микропланшеты.

В ELISA используются конъюгаты антител с ферментом, которые, реагируя с соответствующими «хромогенными» субстратами, образуют окрашенные соединения с определенными оптическими характеристиками. Этот метод более производителен по сравнению с классическими жидкофазными методами РИА и ИФА.

Однако необходимо помнить о недостатках метода. В частности, высокую точность измерений могут обеспечить только специальные анализаторы.

Кроме того, свойства и качество полистироловых микропланшет, используемых в ELISA, при недостаточно оптимальной технологии их производства могут изменяться от партии к партии и даже от лунки к лунке, что драматически влияет на качество и воспроизводимость гормонального анализа.

Высокочувствительные методы третьего

поколения

Флюоресцентный иммуноанализ. Существует несколько разновидностей данного метода. В последние 30 лет большое распространение в гормональной диагностике получил иммуноанализ с флюоресценцией, отсроченной во времени (Delfia), где в качестве метки используется редкоземельный элемент европий.

Это принципиально новый тип иммуноанализа. Дельфия позволяет определять стероидные гормоны в пикограммовых количествах, а гипофизарные — в концентрациях от 0,03 мЕд/л (для ТТГ) до 0,15 мЕд/л (для Прл). Дельфия является технологией выбора при проведении скрининга на врожденный гипотиреоз и ВДКН.

Люминесцентный иммуноанализ. Наиболее оптимальными методами иммуноанализа являются фотоэмиссионные или люминесцентные методы. Наибольшее применение в иммуноанализе получил метод с усилением люминесцентного свечения.

Метод усиленной люминесценции

Усиление реакции люминесценции достигается добавлением люминогенного субстрата, люми-нола или изолюминола и специального усилителя.

Последний резко усиливает интенсивность и продолжительность свечения, что и обеспечивает высокую чувствительность и воспроизводимость метода. Световой сигнал регистрируется специальным анализатором (люминометры).

Метод высокопроизводителен, обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Он наиболее оптимален при обследовании населения на гипотиреоз, так как по-

зволяет определять свободный тироксин в концентрации 8 пмоль/л. Высокая чувствительность определения низкого уровня ТТГ (

Источник: https://cyberleninka.ru/article/n/16861900

Комплексное исследование на гормоны (12 показателей)

Методы анализа гормонов

[40-424] Комплексное исследование на гормоны (12 показателей)

6490 руб.

Комплексное исследование на стероидные гормоны (минералокортикоиды, глюкокортикоиды и половые гормоны), используемое при диагностике “вирилизующих синдромов” (синдрома поликистозных яичников, опухолей половых желез и надпочечников, болезни Кушинга, врождённой гиперплазии коры надпочечников), а также при оценке функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы.

Синонимы русские

Стероидные гормоны, минералокортикоиды, глюкокортикоиды и половые гормоны.

Синонимы английские

Steroid hormones, Serum, Mineralocorticoids, glucocorticoids and sex hormones.

Метод исследования

Высокоэффективная жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ВЭЖХ-МС).

Единицы измерения

Нг/мл (нанограмм на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
  • Исключить прием эстрогенов, андрогенов за 48 часов до исследования.
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
  • Не курить 3 часа до исследования.

Общая информация об исследовании

Синтез стероидных гормонов представляет собой многоступенчатый процесс, в ходе которого холестерин (холестерол) под действием нескольких ферментов превращается в активные соединения, выполняющие различные функции. В зависимости от физиологических эффектов стероидные гормоны разделяют на минералокортикоиды, глюкокортикоиды и половые гормоны.

Минералокортикоиды и глюкокортикоиды образуются только в коре надпочечников, в то время как половые гормоны – как в коре надпочечников, так и в половых железах и жировой ткани.

В организме достигается определенная концентрация и соотношение стероидных гормонов, что необходимо для нормального развития половой системы и половых признаков, поддержания водно-электролитного баланса и сосудистого тонуса, а также адаптации к факторам внешней среды.

Нарушение этого соотношения приводит к развитию широкого спектра заболеваний, среди которых наибольшее значение имеют так называемые вирилизующие синдромы (синдром поликистозных яичников, болезнь Кушинга, аденома и карцинома коры надпочечников (синдром Кушинга), а также врождённая гиперплазия коры надпочечников).

Важно отметить, что дифференциальная диагностика указанных заболеваний не может быть осуществлена на основании только клинических признаков, ее основой является комплексное определение уровня стероидных гормонов и их предшественников (всего 12 соединений). Такой анализ позволяет производить одновременную оценку всех трех групп стероидных гормонов.

Так, кортикостерон и дезоксикортикостерон – предшественники альдостерона, и поэтому измерение их концентрации позволяет оценить особенности синтеза минералокортикоидов в организме. Определение уровня 17-ОН-прогестерона (17-ОПГ), 21-деоксикортизола, кортизола и кортизона позволяет охарактеризовать этапы синтеза глюкокортикоидов. Прогестерон, андростендион, дегидроэпиандростерон (ДЭА) и тестостерон относятся к половым гормонам.

Комплексный анализ на стероидные гормоны является обязательным компонентом дифференциальной диагностики врождённой гиперплазии коры надпочечников – адреногенитального синдрома – группы аутосомно-рецессивных ферментопатий, сопровождающихся нарушением синтеза стероидных гормонов.

В зависимости от тяжести заболевания, адреногенитальный синдром может проявляться в детстве, подростковом или взрослом возрасте. Его наиболее частая форма (95  % случаев) обусловлена дефицитом 21-гидроксилазы, при котором нарушается синтез кортизола и альдостерона.

Характерный лабораторный признак дефицита 21-гидроксилазы – значительное повышение уровня 17-ОПГ, ДЭА, андростендиона и тестостерона при значительном снижении кортикостерона, дезоксикортикостерона и кортизола.

Следует отметить, что только с помощью комплексного исследования на стероидные гормоны удается дифференцировать дефицит 21-гидроксилазы с другим, более редким вариантом адреногенитального синдрома – дефицитом 11-бета-гидроксилазы, так как обе ферментопатии имеют схожую клиническую картину.

В отличие от дефицита 21-гидроксилазы, для дефицита 11-бета-гидроксилазы характерен избыток дезоксикортикостерона. С помощью комплексного исследования на половые гормоны можно диагностировать и другие формы адреногенитального синдрома (дефицит 17-альфа-гидроксилазы, 3-бета-гидроксистероиддегидрогеназы).

Кроме того, комплексное исследование на стероидные гормоны может быть использовано для оценки функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы при обследовании пациента с признаками недостаточности коры надпочечников.

При интерпретации результата исследования следует учитывать некоторые особенности метаболизма стероидов. Большая часть стероидных гормонов находится в крови в связанном состоянии (связана со стероидсвязывающим глобулином, сульфатирована), то есть неактивна.

Доля активного гормона зависит от физиологического состояния организма, приема некоторых лекарственных препаратов, сопутствующих патологий. В норме только треть общего количества стероидных гормонов присутствует в свободном состоянии и ответственна за эффекты, проявляемые в органах-“мишенях”.

Исследование позволяет определить общее количество стероидных гормонов в сыворотке крови (при этом не оцениваются по отдельности активная и связанная фракции гормона).

Кроме того, действие стероидных гормонов может модифицироваться при их взаимодействии с другими гормонально активными соединениями на уровне связывания со специфическими рецепторами, поэтому результат теста не всегда коррелирует со степенью выраженности клинических проявлений синдрома вирилизации. Иными словами, исследование позволяет оценить концентрацию стероидных гормонов, но не их биоактивность в организме.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики заболеваний, проявляющихся синдромом вирилизации;
  • для дифференциальной диагностики клинических форм адреногенитального синдрома;
  • для оценки функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы у пациента с признаками недостаточности коры надпочечников.

Когда назначается исследование?

  • При обследовании пациентки с симптомами гиперандрогении (рост волос над верхней губой, на подбородке, “белой линии” живота, акне тяжелой степени, изменения тембра голоса, клиторомегалия, увеличение мышечной массы);
  • при обследовании младенца с признаками нарушения дифференцировки пола (наружные половые органы, обладающие признаками как женского, так и мужского пола);
  • при обследовании пациента с признаками недостаточности коры надпочечников (слабость, быстрая утомляемость, тошнота, рвота, потеря мышечной массы и веса, нарушения аппетита, гипотония, нарушения сознания).

Что означают результаты?

Референсные значения

Возраст

Референсные значения

1-7 дней

26-156 нг/мл

7-14 дней

3-45 нг/мл

2 нед. – 3 мес.

9-54 нг/мл

3 мес. – 1 год

7-46 нг/мл

1 год – 17 лет

6-30 нг/мл

Взрослые (утро)

12-35 нг/мл

Взрослые (вечер)

6-28 нг/мл

Возраст

Референсные значения

1 мес. – 1 год (утро)

46-230 нг/мл

1 год – 6 лет (утро)

60-250 нг/мл

6 – 18 лет (утро)

46-150 нг/мл

Взрослые (утро)

46-206 нг/мл

Взрослые (вечер)

18-136 нг/мл

Возраст

Референсные значения

1 – 17 лет (утро)

1,35-18,6 нг/мл

1 – 17 лет (вечер)

0,7-6,2 нг/мл

Старше 17 лет (утро)

1,3-8,2 нг/мл

Старше 17 лет (вечер)

0,6-2,2 нг/мл

Возраст

Референсные значения

1 мес. – 1 год

0,07-0,49 нг/мл

1-7 лет

0-0,37 нг/мл

7-14 лет

0-0,34 нг/мл

Больше 14 лет

0-0,19 нг/мл

Пол

Возраст

Референсные значения

Женский

7-10 лет

0-0,94 нг/мл

10-13 лет

0-0,74 нг/мл

13-16 лет

0-0,64 нг/мл

16-18 лет

0-0,47 нг/мл

Больше 18 лет

0-0,33 нг/мл

Мужской

7-10 лет

0-0,59 нг/мл

10-13 лет

0-0,89 нг/мл

13-16 лет

0-0,71 нг/мл

16-18 лет

0-0,88 нг/мл

Больше 18 лет

0-0,68 нг/мл

Мужской

1-17 лет

0.0-0.15

Более 17 лет

0.0-0.11

Женский

1-11 лет

0.0-0.26

11-12 лет

0.0-2.55

12-13 лет

0.0-8.56

13-14 лет

0.0-6.93

14-15 лет

0.0-12.04

15-16 лет

0.0-10.76

16-17 лет

0.0-12.94

Более 17 лет, по фазам цикла

Менструальная (1-6-й день)

0.0-0.17

Фолликулиновая (пролиферативная) (3-14-й день)

0.0-1.35

Овуляторная (13-15-й день)

0.0-15.63

Лютеиновая (15-й день – начало менструации)

0.0-25.55

Постменопауза

0.0-0.1

1-12-я нед. бер-ти

6.25-45.46

12-24-я нед. бер-ти

Источник: https://helix.ru/kb/item/40-424

Моя железа
Добавить комментарий